超高倍率顯微鏡能否檢查泌尿道病原體問(wèn)題，在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)界已經(jīng)爭(zhēng)論了六、七年。與前些年前相比，不再是一片反對(duì)聲了，現(xiàn)在的情況是：凡是使用過(guò)或仔細(xì)看過(guò)超高倍率顯微鏡檢查泌尿道分泌物的單位或個(gè)人基本執(zhí)肯定態(tài)度，反之，則可能執(zhí)懷疑或否定態(tài)度。正像朱忠勇老師所說(shuō)，現(xiàn)在不僅一些小醫(yī)院在使用這種顯微鏡，就是很多大的醫(yī)療單位也正在或開(kāi)始用上了這種顯微鏡。據(jù)作者在網(wǎng)上看到的資料，05年世界銀行日元和德元貸款支持中國(guó)建立、完善“疾病預(yù)防控制中心”的部分省市醫(yī)療器械招標(biāo)清單中，從南到北，超高倍顯微鏡就有數(shù)百臺(tái)之多，可見(jiàn)人們對(duì)超高倍顯微鏡的認(rèn)同程度和其影響力。

*近，全軍醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心，南京軍區(qū)福州總醫(yī)院朱忠勇老師在中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志撰文對(duì)此提出質(zhì)疑。作為中國(guó)**批超高倍顯微鏡研發(fā)的參與者，而且目前仍在繼續(xù)從事這一領(lǐng)域研究，想就有些問(wèn)題與朱老師等商榷。

一、首先澄清兩個(gè)問(wèn)題：

1、超高倍顯微鏡*初源于美國(guó)斯坦福大學(xué)，中國(guó)的開(kāi)發(fā)只是避開(kāi)原創(chuàng)人的**保護(hù)，重新設(shè)計(jì)了光路，連接了計(jì)算機(jī)系統(tǒng)，使之在國(guó)內(nèi)本土生產(chǎn)，價(jià)格大幅度下降。但此種儀器屬新產(chǎn)品，尚無(wú)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，不少商家競(jìng)相仿制、濫造，市場(chǎng)上魚(yú)目混珠，假貨充斥，非我等的初衷，企業(yè)對(duì)此也是無(wú)可奈何。這么多年來(lái)，對(duì)超高倍顯微鏡的種種責(zé)難和批判，實(shí)際是代人受過(guò)。正象見(jiàn)網(wǎng)上有的網(wǎng)友評(píng)論所言：一本好經(jīng)給歪和尚唸?jiān)伊恕?/p>

2、當(dāng)初超高倍顯微鏡進(jìn)入中國(guó)時(shí)，是和“末梢血分析”捆綁銷(xiāo)售的，國(guó)內(nèi)開(kāi)發(fā)出來(lái)后，考慮到“末梢血分析”是一種檢查方法，沒(méi)有**保護(hù)，所以就原封不動(dòng)保留下來(lái)，供研究、試用。之后“末梢血分析”在名稱(chēng)上演變?yōu)椤耙坏窝獊喗】禉z查”，而內(nèi)容沒(méi)有變，說(shuō)白了，它是美國(guó)人研究的健康篩查方法，據(jù)我們所知，國(guó)內(nèi)只有極少數(shù)人有它的原版培訓(xùn)教材和掌握其分析技術(shù)，目前它也被眾多和尚們唸得不成經(jīng)了。其實(shí)開(kāi)發(fā)超高倍顯微鏡的目的并不是為了推廣一滴血亞健康檢查，而是看到這種顯微鏡有其它廣泛的應(yīng)用前景。如果有學(xué)者對(duì)這一塊感興趣或有疑問(wèn)，請(qǐng)直接上網(wǎng)與美國(guó)研究人員交流。談到“2001 年中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)分會(huì)邀請(qǐng)了有關(guān)專(zhuān)家和個(gè)別該試驗(yàn)的擁護(hù)者，在北京小湯山九華山莊開(kāi)了一個(gè)小范圍的會(huì)議。與會(huì)專(zhuān)家一致認(rèn)為該項(xiàng)檢查沒(méi)有科學(xué)根據(jù)；所謂“超高倍顯微鏡”能放大20000倍，有的廠家廣告甚至說(shuō)可以放大30000～35000倍云云，根本不可能”一事，本人也參加了這次會(huì)議，在我的記憶中會(huì)議的*后結(jié)論是：認(rèn)為超高倍顯微鏡檢查泌尿生殖道微生物是可行的，并決定召開(kāi)北戴河專(zhuān)題討論與經(jīng)驗(yàn)交流會(huì)；對(duì)于“一滴血亞健康檢查”的結(jié)論是既不支持，又不反對(duì)，即不在中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志刊登此類(lèi)文稿，也不再發(fā)表批判文章，因?yàn)椤耙坏窝獊喗】禉z查”不屬于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的范疇。誠(chéng)請(qǐng)會(huì)議的主持人查看會(huì)議記錄，以免混淆視聽(tīng)。當(dāng)然，放大30000－35000倍之說(shuō)純糸不法商家的騙局。

二、超高倍顯微鏡是否提高了分辨力？

朱老師展示的公式d=0.61λ/(n×sinθ)是正確的，這是160多年前物理學(xué)家導(dǎo)出的關(guān)于顯微鏡分辨率的公式，至今沒(méi)有被推翻。但是，隨著科技的進(jìn)步，公式中的λ（即光的波長(zhǎng)）已經(jīng)可以比較容易改變了，例如我們使用的白織燈光源，如果將它變成冷光源，就要將它的紅、橙、黃成份濾去，留下綠、藍(lán)、紫等成份，光的波長(zhǎng)就縮短了，分辨力就有提高。如λ變成400um，分辨力不再是0.2um(100倍物鏡)，而是0.16um，如果λ變成350um，分辨力可以提高到0.14um。

另外，超高倍顯微鏡不僅僅是采用CCD或CMOS將顯微物像投影到屏幕上，它使用了二次放大技術(shù)，也即在放大器中加了一組透鏡組，經(jīng)計(jì)算機(jī)顯示在屏幕上成了數(shù)字信號(hào)，它是實(shí)實(shí)在在的顯微放大。因?yàn)槿搜鄣姆直媪κ?.1－0.2mm，盡管顯微鏡的分辨力達(dá)到了微米級(jí)，我們用目鏡觀察（100倍物鏡下），也只能分辨0.2um左右的質(zhì)點(diǎn)距離。如果將物像再放大10倍，達(dá)到10000倍，那么距離0.05um的兩質(zhì)點(diǎn)顯示在屏幕上是0.5mm，顯然人眼就可以分辨開(kāi)來(lái)了。這種情況在目鏡下*大僅1000倍，兩質(zhì)點(diǎn)顯示才0.05mm，所以無(wú)法分辨。它與d=0.61λ/(n×sinθ)公式無(wú)關(guān)，超高倍顯微鏡是基于這兩點(diǎn)而實(shí)現(xiàn)的。高清晰度是二次光學(xué)放大的前提，現(xiàn)今，提高顯微鏡分辨力還可采用其它技術(shù)，也不涉及d=0.61λ/(n×sinθ)公式。

三、關(guān)于泌尿生殖道病原微生物檢查

眾所周知，我國(guó)泌尿生殖道病原微生物約10余種，都有其形態(tài)學(xué)特征，例如：淋病雙球菌大多呈雙球形，成堆出現(xiàn)在白細(xì)胞、膿細(xì)胞或柱狀上皮細(xì)胞內(nèi) ，其它雙球菌則幾乎不成堆出現(xiàn)在細(xì)胞內(nèi)，尤其不成堆出現(xiàn)在柱狀上皮細(xì)胞內(nèi)。衣原體在柱狀上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)形成包涵體，并在生長(zhǎng)周期達(dá)一定時(shí)刻向細(xì)胞外排放原體和網(wǎng)狀體，但胞漿和胞核完好無(wú)損，受感染細(xì)胞能繼續(xù)生存。這是其它病原微生物所不具有的特征。又如，人乳突瘤狀病毒感染鱗狀上皮細(xì)胞后，在細(xì)胞核內(nèi)生長(zhǎng)繁殖，*終形成挖空細(xì)胞。發(fā)現(xiàn)挖空細(xì)胞就提示乳突瘤狀病毒感染，挖空細(xì)胞是非常容易辨認(rèn)的。單純皰疹病毒感染可出現(xiàn)細(xì)胞核的融合，有時(shí)成為巨核細(xì)胞。與之相類(lèi)似的是巨細(xì)胞病毒感染，但它的特征是細(xì)胞核周環(huán)形包涵體，稱(chēng)作“貓頭鷹眼征”。如此等等，都是前輩們長(zhǎng)期觀察的經(jīng)驗(yàn)積累，早已總結(jié)成文，無(wú)須再行論證。

近年，美國(guó)TCT及TBS系統(tǒng)的介導(dǎo)文獻(xiàn)中均將這些特征作為病原微生物的診斷依據(jù)。然而，實(shí)踐證明，顯微鏡檢查泌尿生殖道病原微生物的陽(yáng)性檢出率不高。取而代之是細(xì)菌培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng)、抗原抗體、單克隆、DNA、核酸技術(shù)等，這些檢查的敏感性和特異性是肯定的。不過(guò)，事物都有雙重性，沒(méi)有絕對(duì)的**，以衣原體檢查為例：我們知道，衣原體原體較廣泛地存在于人類(lèi)生活的環(huán)境里，在一些特定的人群中，污染潔具的互用，不潔用水洗身以及公共游泳場(chǎng)所的消毒不嚴(yán)等，很可能出現(xiàn)衣原體原體傳播，但一般來(lái)說(shuō)它只“寄居”在尿道前部或陰道，不一定侵入到較深的柱狀上皮細(xì)胞區(qū)域。這些人的前尿道或陰道標(biāo)本中含有衣原體原體，用被認(rèn)為是“金標(biāo)準(zhǔn)”的細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，同樣能培養(yǎng)出包涵體來(lái)。但是體外細(xì)胞培養(yǎng)出現(xiàn)包涵體，并不意味在被檢者體內(nèi)也有包涵體，這就有可能給臨床診斷帶來(lái)困惑，光憑細(xì)胞培養(yǎng)陽(yáng)性，能診斷是衣原體感染嗎？需要進(jìn)行治療嗎？

人乳突瘤狀病毒（HPV）的DNA檢查也是這樣。據(jù)文獻(xiàn)介紹，人類(lèi)是HPV**宿主，大部分人的一生，都有過(guò)HPV感染史。流行病學(xué)調(diào)查顯示，人體皮膚；特別是會(huì)陰部常常檢出HPV，所以各國(guó)婦科專(zhuān)家提出檢查HPV應(yīng)該DNA與細(xì)胞學(xué)同時(shí)進(jìn)行。加德納桿菌、白色念珠菌、單純皰疹病毒等的檢查也應(yīng)如此。沒(méi)有在患者泌尿生殖道細(xì)胞內(nèi)看到病原微生物或由微生物引起的細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，僅僅是細(xì)菌培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng)、抗原抗體、單克隆、DNA或核酸技術(shù)檢查等“陽(yáng)性”，臨床醫(yī)生是不放心的。

針對(duì)傳統(tǒng)的顯微鏡下微生物與細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查，陽(yáng)性檢出率低，費(fèi)時(shí)、費(fèi)事的缺陷，我們?cè)诖髮?zhuān)院校和中科院等研究院所的支持下，歷時(shí)數(shù)年，耗費(fèi)巨資，開(kāi)發(fā)了超高倍顯微鏡下的泌尿生殖道“活細(xì)胞學(xué)檢查”。它包括：標(biāo)本的取材方法與器具、制片方法與制片機(jī)、物像顯示與精確測(cè)量、細(xì)胞和微生物的識(shí)別與鑒別、計(jì)算機(jī)操作平臺(tái)與自動(dòng)生成彩色圖文報(bào)告系統(tǒng)等部份?，F(xiàn)在能做到在標(biāo)本不染色的情況下，一張涂片即可同時(shí)檢查泌尿生殖道常見(jiàn)的全部病原微生物，包括：淋病雙球菌、梅毒螺旋體、白色念珠菌、加德納桿菌、滴蟲(chóng)、支原體、衣原體、單純皰疹病毒、乳突瘤狀病毒、巨細(xì)胞病毒等。并且能夠明確告訴醫(yī)生，大部分微生物是在細(xì)胞內(nèi)檢出的，有些可以判定是“活”的，可以在醫(yī)院PACS系統(tǒng)或局域網(wǎng)中提供給臨床AVI文件。*近，我們又成功地將宮頸細(xì)胞學(xué)檢查移植到超高倍顯微鏡下進(jìn)行，開(kāi)發(fā)了宮頸活細(xì)胞學(xué)檢查，包括細(xì)胞制片機(jī)和標(biāo)本攪拌濾過(guò)瓶在內(nèi)全部本土化，大大降低了宮頸癌篩查和女性婦科感染病變的檢查費(fèi)用。

四、關(guān)于支原體問(wèn)題

尿道標(biāo)本中支原體采用超高倍顯微鏡檢查，國(guó)內(nèi)有學(xué)者從事這一研究長(zhǎng)達(dá)10多年之久。國(guó)際上早已公認(rèn)解脲支原體能在細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)、繁殖，所以采用超高倍顯微鏡檢查簡(jiǎn)便、快捷，很容易與衣原體、皰疹類(lèi)病毒區(qū)分開(kāi)來(lái)，因?yàn)樗恍纬砂w。把支原體作為機(jī)會(huì)致病菌或伴生病原體是正確的，臨床要求實(shí)驗(yàn)室檢查可能仍然是必要的。如果認(rèn)為超高倍顯微鏡不能檢查尿道標(biāo)本中支原體，希望有一些實(shí)驗(yàn)資料來(lái)證實(shí)國(guó)內(nèi)學(xué)者曾經(jīng)發(fā)表過(guò)的論文和實(shí)驗(yàn)資料是錯(cuò)誤的，這樣就更有說(shuō)服力。1994年－1995年性學(xué)雜志有系列研究文章報(bào)導(dǎo)。

作為研究與開(kāi)發(fā)必然要有一個(gè)逐步完善的過(guò)程，必然會(huì)有一些引起質(zhì)疑和爭(zhēng)論的地方，正象朱老師指出的“國(guó)外至今也未有相關(guān)報(bào)導(dǎo)”，因此便沒(méi)有更多資料可以借鑒。還有些問(wèn)題須要深入探討與求教，如朱老師提到的“布朗運(yùn)動(dòng)”，生物細(xì)胞內(nèi)能產(chǎn)生布朗運(yùn)動(dòng)嗎？為什么經(jīng)過(guò)一定時(shí)間后，這種細(xì)胞內(nèi)的布朗運(yùn)動(dòng)會(huì)停止呢？它的運(yùn)動(dòng)軌跡符合愛(ài)因斯坦公式嗎？活的白細(xì)胞內(nèi)溶酶體的運(yùn)動(dòng)也是布朗運(yùn)動(dòng)嗎？諸如此類(lèi)，誠(chéng)心希望更多專(zhuān)家、學(xué)者的參與、賜教。

*后，謝謝朱老師對(duì)超高倍顯微鏡的關(guān)心、愛(ài)護(hù)。